7 technik, które doprowadzają naukowców do szału, dotyczących znakowania próbek

image

Każdy, w pewnym momencie swojej kariery naukowej, zetknął się z techniką, która jest o wiele trudniejsza niż to konieczne z powodu trudności w etykietowaniu próbek. Niezależnie jednak od tego, czy etykiety ciągle odpadają, czy też tusz nieustannie się rozmazuje lub blaknie, zazwyczaj istnieje skuteczne rozwiązanie problemu. Poniżej wymieniliśmy kilka najlepszych technik eksperymentalnych, które doprowadzają naukowców do szału, gdy przychodzi czas na etykietowanie próbek.

#1 - Histochemia

Znaczna część histochemii opiera się na ostrych rozpuszczalnikach, które mogą szybko spowodować uszkodzenie etykiet (aby uzyskać bardziej kompletny podział histochemii, możesz przejść tutaj i tutaj). Etykiety te stykają się z etanolem podczas odwadniania, ksylenem podczas oczyszczania próbek oraz stopioną parafiną, używaną do osadzania tkanki w celu wykonania sekcji. Po wykonaniu sekcji, szkiełka są zanurzane w barwnikach histologicznych, takich jak eozyna i hematoksylina. Wszystkie te substancje chemiczne mogą powodować utratę przyczepności etykiet, a także rozmazywanie się lub rozmazanie wydruku. Dlatego etykiety stosowane w histochemii muszą być odporne na działanie wielu substancji chemicznych, w szczególności ksylenu, eozyny i hematoksyliny, a także gorącej parafiny. Na rynku dostępne są zautomatyzowane drukarki do slajdów, które bezpośrednio drukują dowolne informacje na szkiełku szklanym. Jednak drukarki te mogą być drogie i nie dają bardzo odpornych wydruków, dlatego najbardziej zalecanym rozwiązaniem jest stosowanie termoplastycznych etykiet chemoodpornych do tych szkiełek, ponieważ zapewniają one doskonałą ochronę przed eozyną, hematoksyliną i innymi substancjami chemicznymi.

#2 - Immunohistochemia

Immunohistochemia (IHC) ma swoje miejsce obok histochemii z jednego powodu: odzyskiwanie antygenu. Przed barwieniem immunologicznym fragmenty próbek muszą być poddane działaniu serii buforów i wygotowane w celu wyeliminowania mostków metylenowych pomiędzy cząsteczkami, które powstają podczas utrwalania, co powoduje ponowne odsłonięcie miejsc antygenowych i umożliwia przeciwciałom związanie docelowego epitopu. Zastosowanie laminowania wraz z etykietami chemoodpornymi pomoże zapewnić, że etykiety pozostaną przytwierdzone do preparatów podczas ich obróbki.

#3 - Etykietowanie próbek PCR

Zarówno PCR, jak i ilościowy PCR (qPCR) wykorzystują pojemniki, które są niezwykle trudne do prawidłowego oznakowania. W PCR używa się małych probówek o pojemności 0,2 ml, w których jest niewiele miejsca na czytelny napis, a w qPCR często używa się płytek 96-dołkowych, które są uszczelnione półprzezroczystym kawałkiem folii, która musi pozostać przezroczysta, bez spódnic, na których można by pisać. W przypadku probówek PCR etykiety z kropkami zapewnią trochę miejsca na czytelny nadruk lub napis; jednak optymalnym rozwiązaniem jest PCR-TagTrax™, nadająca się do druku bezklejowa, uniwersalna etykieta, która wygodnie mieści się wokół każdej probówki. Przyjazny dla rękawic identyfikator może być stosowany zarówno do probówek PCR i pasków PCR o wysokim profilu, jak i do płytek qPCR bez kołnierza, jest kompatybilny z prawie wszystkimi termocyklerami PCR i nadaje się do druku termotransferowego. PCR-TagTrax zapewnia znacznie więcej miejsca na identyfikację próbek i może być łączony w wielu różnych konfiguracjach, które pozwalają zarówno na znakowanie próbek PCR do użycia w termocyklerach, jak i do przechowywania w zamrażarkach laboratoryjnych. Można nawet oderwać końcówkę etykiety, przykleić ją do książki laboratoryjnej i używać jako odnośnika w dokumentacji laboratoryjnej.

#4 - Witryfikacja

Większość laboratoriów zajmujących się pierwotnymi i unieśmiertelnionymi liniami komórkowymi używa witryfikacji do zamrażania komórek. Wymaga to potraktowania komórek środkiem krioprotekcyjnym, takim jak dimetylosulfotlenek (DMSO), a następnie zamrożenia ich w ciekłym azocie, co może spowodować, że etykiety nie będą działać. Prostym rozwiązaniem jest zastosowanie etykiet krio, które są odporne zarówno na działanie DMSO, jak i ciekłego azotu (-196°C/-321°F), z wydrukiem termotransferowym. W przypadku linii komórkowych, które były już przechowywane i wymagają ponownego etykietowania, niektóre etykiety, takie jak CryoSTUCK® , przyklejają się do fiolki, nawet jeśli jest ona nadal zamrożona.

Proces witryfikacji może okazać się jeszcze trudniejszy dla laboratoriów zajmujących się techniką wspomaganego rozrodu, które przeprowadzają zapłodnienie in vitro (IVF). Zarodki, jaja i plemniki muszą być przechowywane w słomkach kriogenicznych o niskiej zawartości lotnych związków organicznych, oznaczonych etykietami kriogenicznymi odpornymi na szybkie zamrażanie i działanie krioprotektantów (np. DMSO).

chemia


#5 - Oznaczanie próbek Western blot

Wykonanie Western blot wymaga wiele cierpliwości, a jeszcze więcej - odpowiedniego etykietowania. Od czasu, gdy próbki trafiają do żelu SDS-PAGE do czasu, gdy są sondowane przeciwciałami na membranie PVDF lub nitrocelulozowej po etapie transferu, nie ma skutecznego sposobu, aby je śledzić. Najlepszą opcją na razie jest po prostu napisanie drobnym, ciemnym ołówkiem na bibule jak najwięcej informacji, jednocześnie przechowując bibułę w małym pudełku lub torebce oznaczonej etykietą do głębokiego mrożenia (najlepiej wydrukowaną metodą termotransferową, aby była odporna na przechowywanie w niskiej temperaturze).

#6 - Transmisyjna mikroskopia elektronowa

Znakowanie próbek i przygotowanie ich do mikroskopii elektronowej transmisyjnej (TEM) może stanowić kilka wyzwań. Pierwszą przeszkodą jest bezpieczna identyfikacja próbki zakonserwowanej w bloku żywicznym.  Etykieta dla tych próbek musi być umieszczona wewnątrz żywicy przed jej utwardzeniem i dlatego musi być odporna na działanie płynnej żywicy, jak również na pieczenie. Co więcej, bloki żywicy mogą być przechowywane przez dłuższy czas, co wymaga rozwiązania identyfikacyjnego, które będzie trwałe. Etykiety ResiTAG™ z nadrukowanymi kodami kreskowymi (również przy użyciu drukarki termotransferowej) można umieścić w formie, zapewniając sposób identyfikacji tych próbek za pomocą numeracji seryjnej oraz kodów kreskowych 1D lub 2D do długotrwałego przechowywania.

#7 - Sterylizacja

Sterylizacja może być przeprowadzana na wiele sposobów, z których każdy stwarza ryzyko dla etykiet: autoklaw parowy, tlenek etylenu w gazie lub promieniowanie gamma. Autoklawy, w których etykiety są poddawane działaniu podwyższonej temperatury i ciśnienia, są stosowane do ogólnego sprzętu laboratoryjnego, natomiast sterylizacja tlenkiem etylenu i promieniowaniem gamma są wykorzystywane głównie do sterylizacji urządzeń i instrumentów medycznych. Etykiety odporne na autoklawy z nadrukiem termotransferowym są skutecznym rozwiązaniem dla wszystkich trzech metod sterylizacji, ponieważ są odporne na temperatury do 150°C, ciśnienia do 30 psi, wysoką wilgotność względną, działanie substancji chemicznych i promieniowanie gamma do 50 KGy.